乙型肝炎病毒耐药基因检测 v2

INNO-LiPA HBV DR v2

一、临床背景

乙型肝炎病毒，即HBV，为嗜肝DNA病毒。完整的HBV颗粒又名Dane颗粒，分为包膜与核心两部分。HBV的抵抗力很强，能耐受60℃ 4小时及一般浓度的消毒剂。据调查，我国有一亿两千万人口为HBV携带者，其中约10%可发展为慢性肝炎。慢性患者和病毒隐性携带者是乙型肝炎的主要传染源，其传染性贯穿于整个病程，传播途径主要为血液、体液及母婴，易感人群为新生儿及成人。HBV通过皮肤、粘膜进入机体后，迅速通过血流到达肝和其它器官。乙肝的组织损伤主要由于机体的免疫应答所致。临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。治疗乙肝的主要药物有Lamivudine、Adefovir、干扰素等。一些研究表明，Lamivudine用药治疗4年后的耐药性比率为60%；Adefovir用药治疗1年后的耐药性比率为3.5%。一些HBV感染者在接受肝移植手术之后，更容易产生对Adefovir的耐药性。

 二、试剂用途

INNO-LiPA HBV DR v2 采用线性反向探针杂交检测的方法，可同时检测出HBV的野生株，以及与Lamivudine、Adefovir两种治疗药物有关的HBV耐药基因的突变，即： HBV逆转录酶编码区B、C、D结构域的野生型或突变型。

 三、检测方法及原理

INNO-LiPA HBV DR v2 是基于反向杂交的原理。扩增后的被生物素标记的HBV DNA产物，与平行线形式固定在尼龙膜检测条上的特异性寡核苷酸探针杂交。杂交后，未能杂交的DNA从检测条上被洗脱。随后加入标记有碱性磷酸酶的链霉亲和素，与杂交产物上标记的生物素结合。最后加入BCIP/NBT显色，显现紫色/棕色。从而判断结果。

对HBV逆转录酶编码区B、C、D结构域的扩增，应使用INNO-LiPA HBV DR v2 扩增引物。

四、检测特点

1. INNO-LiPA HBV DR v2 试剂盒包含特异性扩增引物，新一代产品只用一次PCR扩增，缩短检测时间，减少检测步骤。

2. 可以同时检测出乙型肝炎病毒野生株以及与Lamivudine、Adefovir耐药性相关的乙型肝炎病毒基因变异。

※rt = reverse transcriptase（逆转录酶）

3. 检测条上包括一条标记线，2条对照线，32条平行探针线。

4. 酶标记物对照线是显色反应的对照，扩增反应对照线包括通用HBV探针，以检测HBV DNA

扩增产物的存在。

5. 对乙型肝炎病毒混合亚型的高敏感性

▲ 对随访病历克隆分析证实与LiPA检测的结果相同。

▲ 有助于对乙型肝炎病毒耐药性进行动态分析。

6. 检测准确、快捷，操作简单，可手工操作。

7. 肉眼轻松直观判定结果。

8. 重复性好，便于质控和标准化操作。

五、检测步骤及时间

扩增后总检测时间2小时30分钟